多肽合成的步驟介紹

多肽合成又叫肽鏈合成，是一個固相合成順序一般從C端(羧基端)向N端(氨基端)合成。

 

多肽合成的步驟：

 

1、樹脂的選擇及氨基酸的固定

 

　　用于多肽合成的高分子的載體主要有3類:交聯(lián)聚苯乙烯;聚酰胺;聚乙烯乙二醇脂類樹脂。氨基酸的固定主要是通過保護(hù)的氨基酸的羧基同樹脂的反應(yīng)基團之間形成共價鍵來實現(xiàn)。

 

2、氨基、羧基、側(cè)鏈的保護(hù)及脫除

 

　　要成功合成具有特定的氨基酸順序的多肽，需要對暫不參與形成酰胺鍵的氨基和羧基加以保護(hù)，同時對氨基酸側(cè)鏈上的活性基團也要保護(hù)，反應(yīng)完成后再將保護(hù)基團除去。

 

　　近年來，F(xiàn)MOC合成法得到了廣泛的應(yīng)用。羧基通常用形成酯基的方法進(jìn)行保護(hù)，甲酯和乙酯是逐步合成中保護(hù)羧基的常用方法。

 

3、成肽反應(yīng)

 

　　固相中的成肽反應(yīng)一般是將兩個相應(yīng)的氨基被保護(hù)的氨基酸，及羧基被保護(hù)的氨基酸放在溶液內(nèi)并不形成肽鍵，要形成酰胺鍵，經(jīng)常用的手段是將羧基活化，變成混合酸酐、活潑酯、酰氯或用強的縮合劑(如碳二亞氨)形成對稱酸酐等方法來形成酰胺鍵。

 

4、裂解及合成肽鏈的純化

 

　　BOC法用TFA+HF裂解和脫側(cè)鏈保護(hù)基，F(xiàn)MOC法直接用TFA，有時根據(jù)條件不同，其它堿、光解、氟離子和氫解等脫保護(hù)方法也被采用。合成肽鏈進(jìn)一步的精制、分離與純化通常采用液相色譜、親和層析、毛細(xì)管電泳等。